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95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 1 BBL™ Medium Supplement for the Selection of Pathogenic Neisseria
ENG – 6.5 pt on 7.5 pt leadingMLL – 6 pt on 7 pt leading Ten vials, lyophilized; each reconstitutes to 2 mL Ten vials, lyophilized; each reconstitutes to 10 mL Ten vials, lyophilized; each reconstitutes to 10 mL English:
Italiano:
Français :
Español:
páginas
Deutsch:
INTENDED USE – V-C-N Inhibitor is an antibiotic mixture of vancomycin, colistin and nystatin which is
incorporated into culture media to permit selective isolation of Neisseria gonorrhoeae and N. meningitidis.
V-C-N-T Inhibitor contains the same antibiotic mixture as V-C-N Inhibitor with the addition of trimethoprimto improve recovery of pathogenic Neisseria by increasing selectivity of isolation media.
SUMMARY AND EXPLANATION – Media containing V-C-N Inhibitor, e.g., Thayer-Martin Selective Agar,1
are used for isolation of pathogenic Neisseria from the throat, vagina, rectum or urethra.1-3 Not only is the
overgrowth of gonococci and meningococci by contaminants minimized, but the “saphrophytic” Neisseria
species are almost completely suppressed.
Martin et al. modified Thayer-Martin Selective Agar by adding trimethoprim to produce Transgrow Medium
in bottles with a carbon dioxide-enriched atmosphere and Modified Thayer-Martin Agar in plates.4,5 A sig-
nificantly greater number of positive gonococcal isolates from clinical specimens was reported as com-
pared with Thayer-Martin Selective Agar due to the inhibition of swarming Proteus species.5-7 Because of
its improved performance, it is recommended over earlier formulations for the isolation of N. gonorrhoeae.8-10
PRINCIPLES OF THE PROCEDURE – V-C-N Inhibitor contains vancomycin to inhibit gram-positive con-
taminants, colistin to inhibit gram-negative bacteria, including Pseudomonas species, and nystatin to sup-
press the growth of yeasts.
V-C-N-T Inhibitor contains the same antibiotic mixture as V-C-N Inhibitor with the addition of trimethoprim,which inhibits Proteus species.
REAGENTS
Approximate Formula* per 1 mL Reconstituted Solution: *Adjusted and/or supplemented as required to meet performance criteria. Precautions: For Laboratory Use.
V-C-N Inhibitor and V-C-N-T Inhibitor are for use in culture media and not for use in human or animal therapy. Observe aseptic techniques in the reconstitution and addition of these media supplements. Read“Instructions.” This product contains dry natural rubber. Storage Instructions and Reconstitution: On receipt, store at -20 to +8°C. After reconstitution, use imme-
diately or store below -20°C and use within two weeks. Avoid repeated freezing and thawing.
Using a sterile syringe and needle, reconstitute each lyophilized vial by aseptically adding the following vol-umes of sterile purified water: 212227 – 2 mL; 212228 and 212408 – 10 mL. The expiration date applies to the lyophilized product, stored as directed.
Product Deterioration: Examine reconstituted reagents at the time of use for evidence of contamination,
evaporation, or other signs of deterioration.
PROCEDURE
Material Provided: Depending upon which product is ordered, one of the medium supplements listed
above is provided.
Materials Not Provided: Ancillary culture media, reagents, quality control organisms and Iaboratory equip-
ment as required for this procedure.
Instructions: Preparation of Thayer-Martin Agar —
1. Prepare a double-strength base by suspending 7.2 g of BBL™ GC Agar Base or GC Il Agar Base in
100 mL of purified water, using a 500 mL flask. Mix thoroughly, heat with frequent agitation and boil forabout 1 min to assure complete solution of ingredients.
2. Suspend 2 g of BBL Hemoglobin Powder in 100 mL purified water to make a 2% solution. (Mix 2 g
of Hemoglobin Powder with 2 to 3 mL purified water until a smooth paste is achieved. Gradually add
the balance of the water until the solution is homogeneous. If larger volumes are required, use the
same method, maintaining the same ratio of Hemoglobin to purified water.) Alternatively, use BBL
Hemoglobin Solution 2% warmed to approximately 50°C.
3. Sterilize the GC Agar Base or GC Il Agar Base and Hemoglobin solution, if prepared from the powder, by autoclaving at 121°C for 15 min.
4. Cool the sterile solutions to approximately 50°C.
5. Reconstitute BBL™ IsoVitaleX™ Enrichment, 2 mL (see insert for directions).
6. To reconstitute V-C-N Inhibitor, see “Storage Instructions and Reconstitution.” 7. Aseptically add the 100 mL of Hemoglobin, 2 mL of IsoVitaleX Enrichment, 2 mL of V-C-N Inhibitor to
the 100 mL of sterile cooled GC Agar Base or GC II Agar Base.
8. Mix gently but thoroughly and distribute into sterile Petri dishes or other sterile containers.
Size: 5” W x 10.25” LColor: Standard BlackDraft: 9/5/95 95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 2 The V-C-N Inhibitor, 10 mL, is used similarly, by adding the reconstituted contents of one vial to 500 mL of
sterile cooled GC Agar Base or GC II Agar Base (36.0 g of the base in 500 mL purified water to make a dou-
ble-strength base), 500 mL of sterile 2% Hemoglobin solution (approximately 50°C), and 10 mL of IsoVitaleX
Enrichment.
Preparation of Modified Thayer-Martin Agar and Transgrow Medium with Trimethoprim:
1. For preparation of Transgrow Medium, add extra agar to GC Agar Base or GC II Agar Base to bring the final agar concentration to 2% and sterilize by autoclaving at 121°C for 15 min.
2. After mixing the sterile, cooled (approximately 50°C) GC Agar Base or GC II Agar Base, sterile and cooled Hemoglobin Solution, IsoVitaleX Enrichment and V-C-N-T Inhibitor, add 6 mL of sterile 25%
dextrose solution to each liter of medium.*
3. Aseptically dispense into Petri dishes (Modified Thayer-Martin Agar) or (for preparation of Transgrow Medium with Trimethoprim) into horizontally positioned sterile 1 oz. prescription bottles (8- to 10-mL vol-umes) and loosely apply rubber-lined screw caps.
4. After the medium has cooled and solidified in the bottles, introduce a carbon dioxide atmosphere into the bottles by placing a group of bottles in a vacuum chamber, exhaust the air with a vacuum pump(15 Ib negative pressure) and refill the chamber with a filtered mixture of 10% CO2 – 90% air until thechamber is at 5 Ib positive pressure; repeat this step three times. After the third gassing, leave the cham-ber at positive pressure for 2 to 3 h before returning it to atmospheric pressure.
5. Upon opening the chamber, tighten screw caps to make an airtight seal.
* In the BBL formulation for Modified Thayer-Martin Agar the extra dextrose has been eliminated for
improved growth of N. gonorrhoeae. User Quality Control – Examine lyophilized and reconstituted supplement for signs of deterioration as noted
under “Product Deterioration.” Check performance of the finished medium by inoculation with pure cultures
of stable control organisms, producing known, desired reactions. The following cultures are recommended:
Neisseria gonorrhoeae, ATCC® 43069 Staphylococcus epidermidis, ATCC 12228 Modified Thayer-Martin Agar and Transgrow Medium with TrimethoprimIn addition to the cultures listed above: Typical colonial morphology on these media is as follows: Small, grayish-white to colorless, mucoid LIMITATIONS OF THE PROCEDURE – Media into which V-C-N Inhibitor and V-C-N-T Inhibitor are incor-
porated are selective media that may inhibit other pathogenic bacteria, e.g., Haemophilus. Also, the existence
of strains of N. gonorrhoeae inhibited by vancomycin and trimethoprim Iactate have been reported.11,12 It is
suggested that Chocolate Agar and blood agar plates be used in conjunction with selective media to aid in
the isolation of other pathogens that may be present in the specimen.
Nystatin has been reported to be relatively ineffective in inhibiting the growth of yeast contaminants at therecommended concentration.13 Gonococci may be inhibited in the presence of Candida albicans.14,15 While “saprophytic” Neisseria are generally suppressed by selective media, the occasional recovery ofN. lactamica on Thayer-Martin Selective Agar has been reported.16 Some strains of Capnocytophaga species may grow on these selective media when inoculated with oropha-ryngeal specimens.17 Since there is no such entity as a perfect medium, some strains of microorganisms are encountered thatgrow poorly on a particular medium; the nature of the specimens or samples themselves and the physio-logic state of the organisms on isolation can influence recovery of desired species, as well as modify theeffects of inhibitory characteristics of a selective medium for undesired species.
It should be noted that situations are relatively rare when a single medium will suffice both for detection andfor enumeration of specific microorganisms. Each selective medium represents a compromise in that selec-tive agents, while being inhibitory to many undesired species, may also be somewhat inhibitory to specificstrains of the desired species for which the medium was designed.
Appropriate texts should be consulted for further information.17,18 REFERENCES
1. Thayer, J.D., and J.E. Martin, Jr. 1966. Improved medium selective for cultivation of N. gonorrhoeae and N. meningitidis. Public Health Rep. 81:559-562.
2. Mitchell, M.S., D.L. Rhoden, and B.B. Marcus. 1966. lmmunofluorescence techniques for demonstrating bacterial pathogens associated with cerebrospinal meningitis. Ill. Identification of meningococci from thenasopharynx of asymptomatic carriers. Am. J. Epidem. 83:74-85.
3. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer. 1967. Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82:361-363.
4. Martin, J.E., Jr., and A. Lester. 1971. Transgrow, a medium for transport and growth of Neisseria gon- orrhoeae and Neisseria meningitidis. HSMHA Health Rep. 86:30-33.
5. Martin, J.E., J.H. Armstrong, and P.B. Smith. 1974. New system for cultivation of Neisseria gonor- rhoeae. Appl. Microb. 27:802-805.
6. Center for Disease Control. January 2, 1975. Memorandum: recommendation to use the same medium, Modified Thayer-Martin (MTM), in both plates and bottles for the GC culture screening program.
U.S. Public Health Service, Atlanta.
7. Seth, A. 1970. Use of trimethoprim to prevent overgrowth by Proteus in the cultivation of N. gonor- rhoeae. Br. J. Vener. Dis. 46:201-202.
8. Center for Disease Control. 1975. Criteria and techniques for the diagnosis of gonorrhoeae. U.S. Public 9. Evangelista, A.T., and H.R. Beilstein. 1993. Cumitech 4A, Laboratory diagnosis of gonorrhoeae, Coord. ed., C. Abramson. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 3 10. Morello, J.A., W.M. Janda, and G.V. Doern. 1991. Neisseria and Branhamella, p. 258-276. In A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiol-ogy. 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
11. Cross, R.C., M.B. Hoger, R. Neibaur, B. Pasternack, and F.J. Brady. 1971. VCN-inhibited strains of Neisseria gonorrhoeae. HSMHA Health Rep. 86:990-992.
12. Phillips, l., D. Humphrey, A. Middleton, and C.S. Nicol. 1972. Diagnosis of gonorrhoeae by culture on a selective medium containing vancomycin, colistin, nystatin, and trimethoprim (VCNT). A comparisonwith Gram-staining and immunofluorescence. Br. J. Vener. Dis. 48:287-292.
13. Faur, Y.C., M.H. Weisburd, and M.E. WiIson. 1973. A new medium for the isolation of pathogenic Neisseria (NYC Medium). II. Effect of amphotericin B and trimethoprim lactate on selectivity. HealthLab. Sci. 10:55-60.
14. Hipp. S.S., W.D. Lawton, N.C. Chen, and H.A. Gaafar. 1974. Inhibition of Neisseria gonorrhoeae by a factor produced by Candida albicans. Appl. Microbiol. 27:192-196.
15. Hipp, S.S., W.D. Lawton, M. Savage, and H.A. Gaafar. 1975. Selective interaction of Neisseria gonor- rhoeae and Candida albicans and its possible role in clinical specimens. J. Clin. Microbiol. 1:476-477.
16. Edberg, S.C. 1974. The growth of Neisseria lactamica on media selective for pathogenic Neisseriaceae. 17. Baron, E.J., and S.M. Finegold. 1990. Bailey and Scott’s diagnostic microbiology, 8th ed. The C.V.
18. Balows, A., W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy. 1991. Manual of clin- ical microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
TECHNICAL INFORMATION: In the United States telephone Technical Services, toll free (800) 638-8663.
BBL and IsoVitaleX are trademarks of Becton Dickinson and Company.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
D Becton Dickinson Microbiology Systems
Becton Dickinson France S.A.
FRANÇAIS
Supplément de milieu BBL pour la sélection de Neisseria pathogène
Dix flacons, lyophilisés ; un flacon reconstitué donne 2 mL Nº cat. 212227
Dix flacons, lyophilisés ; un flacon reconstitué donne 10 mL Dix flacons, lyophilisés ; un flacon reconstitué donne 10 mL APPLICATION – L’inhibiteur V-C-N est un mélange antibiotique composé de vancomycine, de colistine et de nys-
tatine, lequel est incorporé aux milieux de culture afin de permettre l’isolement sélectif de Neisseria gonorrhoeae et
de N. meningitidis.
L’inhibiteur V-C-N-T contient le même mélange antibiotique que l’inhibiteur V-C-N mais contient en outre dutriméthoprime qui permet d’améliorer la mise en évidence de Neisseria pathogène en augmentant la sélectivité dumilieu d’isolement.
RESUME ET EXPLICATION – Les milieux contenant l’inhibiteur V-C-N, telle la gélose sélective Thayer-Martin,1 sont
utilisés pour l’isolement de Neisseria pathogène de la gorge, du vagin, du rectum ou de l’urètre.1-3 L’inhibiteur
permet non seulement de réduire au minimum la pullulation de gonocoques et de méningocoques par contaminants
mais de presque complètement inhiber la croissance des espèces “saprophytes” de Neisseria.
Martin et al. ont modifié la gélose sélective Thayer-Martin par addition de triméthoprime pour produire le milieuTransgrow utilisé en flacons sous atmosphère enrichie en dioxide de carbone ainsi que la gélose modifiée Thayer-Martin utilisée en boîtes.4,5 Il a été rapporté avec ces milieux un nombre sensiblement plus élevé de mises en évi-dence de gonocoques à partir d’échantillons cliniques qu’avec la gélose sélective Thayer-Martin grâce à l’inhibitiond’espèces de Proteus envahissantes.5-7 Du fait de sa meilleure performance, cette formule est recommandée parrapport aux formules plus anciennes pour l’isolement de N. gonorrhoeae.8-10 PRINCIPES DE LA METHODE – L’inhibiteur V-C-N contient de la vancomycine pour inhiber les contaminants gram-
positifs, de la colistine pour inhiber les bactéries gram-négatives, y compris les espèces de Pseudomonas, et de la
nystatine pour inhiber la croissance de levures.
L’inhibiteur V-C-N-T contient le même mélange antibiotique que l’inhibiteur V-C-N avec l’addition de triméthoprimequi inhibe les espèces de Proteus.
REACTIFS
Formule approximative* par 1 mL de solution reconstituée : Inhibiteur V-C-N-T : Vancomycine . 300 µg *Ajustée et/ou supplémentée en fonction des critères de performance imposés Précautions : usage en laboratoire.
Les inhibiteurs V-C-N et V-C-N-T sont destinés à être additionnés à des milieux de culture et non à être utilisés enthérapie humaine ou animale. Se conformer aux techniques aseptiques durant la reconstitution et l’addition de cesmilieux de supplément. Lire “Instructions”.
Ce produit contient du caoutchouc naturel séché.
Instructions pour la conservation et la reconstitution : dès réception, conserver entre -20 et +8 °C. Utiliser immé-
diatement après reconstitution ou conserver à une température inférieure à -20 °C et utiliser dans un délai de deux
semaines. Eviter de congeler et décongeler à plusieurs reprises.
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 4 Reconstituer chaque flacon lyophilisé à l’aide d’une seringue stérile munie d’une aiguille en ajoutant de manièreaseptique les volumes suivants d’eau purifiée stérile : 212227 – 2 mL ; 212228 et 212408 – 10 mL.
La date de péremption s’applique au produit lyophilisé, conservé tel que prescrit.
Détérioration du produit : examiner les réactifs reconstitués au moment de l’utilisation afin de détecter toute évi-
dence de contamination, d’évaporation ou autres signes de détérioration.
Matériel fourni : selon le produit commandé, un des milieux de supplément mentionnés ci-dessus est fourni.
Matériel non-fourni : les milieux de culture ancillaires, les réactifs, les organismes pour le contrôle de qualité et
l’équipement de laboratoire nécessaire pour cette procédure.
Instructions : préparation de la gélose Thayer-Martin —
1. Préparer une base de double concentration dans un flacon de 500 mL en mettant en suspension 7,2 g de gélose de base GC BBL ou de gélose de base GC II dans 100 mL d’eau purifiée. Mélanger rigoureusement, chauffer en
agitant fréquemment et faire bouillir pendant environ 1 min, afin d’assurer une dissolution complète des ingrédients.
2. Mettre en suspension 2 g de poudre d’hémoglobine BBL dans 100 mL d’eau purifiée pour obtenir une solution
à 2 %. (Mélanger 2 g de poudre d’hémoglobine dans 2 à 3 mL d’eau purifiée jusqu’à obtention d’une pâte
homogène. Ajouter graduellement le reste de l’eau en s’assurant que la solution reste homogène. Si de plus
larges volumes sont nécessaires, utiliser la même méthode en gardant les mêmes proportions d’hémoglobine et
d’eau purifiée.) Alternativement, utiliser la solution d’hémoglobine BBL à 2 %, chauffée à environ 50 °C.
3. Stériliser la gélose de base GC ou la gélose de base GC II et la solution d’hémoglobine, si celle-ci a été préparée à partir de poudre, à l’autoclave à 121 °C pendant 15 minutes.
4. Refroidir les solutions stériles jusqu’à environ 50 °C.
5. Reconstituer l’enrichissement IsoVitaleX BBL afin d’obtenir un volume final de 2 mL (voir les instructions dans
6. Pour reconstituer l’inhibiteur V-C-N, voir “Instructions pour la conservation et la reconstitution”.
7. Ajouter de manière aseptique 100 mL d’hémoglobine, 2 mL d’enrichissement IsoVitaleX et 2 mL d’inhibiteur
V-C-N aux 100 mL de gélose de base GC ou de gélose de base GC II stériles et refroidies.
8. Mélanger doucement mais rigoureusement et distribuer dans des boîtes de Pétri stériles ou autres récipients L’inhibiteur V-C-N, 10 mL, est utilisé de façon analogue en ajoutant le contenu reconstitué d’un flacon à 500 mL de
gélose de base GC ou de gélose de base GC II stériles et refroidies (36,0 g de base dans 500 mL d’eau purifiée pour
obtenir une base de concentration double), 500 mL de solution stérile d’hémoglobine à 2 % (à environ 50 °C) et
10 mL d’enrichissement IsoVitaleX.
Préparation de la gélose Thayer-Martin modifiée et du milieu Transgrow avec triméthoprime :
1. Pour la préparation du milieu Transgrow, ajouter plus de gélose aux géloses de base GC ou GC II pour obtenir une concentration finale en gélose de 2 % et stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 minutes.
2. Après avoir mélangé la gélose de base GC ou la gélose de base GC II stériles et refroidies (environ 50 °C), la solution d’hémoglobine stérile et refroidie, l’enrichissement IsoVitaleX et l’inhibiteur V-C-N-T, ajouter 6 mL de
solution de dextrose à 25 % par litre de milieu.*
3. Dispenser de manière aseptique dans des boîtes de Pétri (gélose Thayer-Martin modifiée) ou (pour la prépara- tion du milieu Transgrow avec triméthoprime) dans des flacons stériles de 1 oz (8 à 10 mL) en position horizon-tale et visser sans serrer les bouchons doublés de caoutchouc.
4. Après que le milieu se soit refroidi et solidifié dans les flacons, y introduire une atmosphère de dioxide de car- bone en plaçant, dans un premier temps, les flacons dans une chambre à vide pour extraire l’air avec une pompe(6,8 kg de pression négative), puis, dans un deuxième temps, en remplissant la chambre avec un mélange filtréde 10 % CO2 et 90 % d’air jusqu’à ce que la chambre soit à 2,3 kg de pression positive. Répéter la dernièreétape trois fois. Après la troisième introduction de mélange gazeux filtré, laisser la chambre sous pression po-sitive pendant 2 ou 3 heures avant de la remettre à pression atmosphérique.
5. Immédiatement après avoir ouvert la chambre, bien serrer les bouchons pour rendre les flacons hermétiques.
* Dans la formule BBL pour la gélose Thayer-Martin modifiée le dextrose supplémentaire a été éliminé pour améliorer
la croissance de N. gonorrhoeae.
Contrôle de qualité réalisé par l’utilisateur – Examiner le supplément lyophilisé et reconstitué pour tout signe de
détérioration comme indiqué dans la rubrique “Détérioration du produit”. Vérifier la performance du milieu complet
en inoculant des cultures pures d’organismes de contrôle stables produisant des réactions connues et désirées. Les
cultures suivantes sont recommandées :
Staphylococcus epidermidis, ATCC 12228 Gélose Thayer-Martin modifiée et milieu Transgrow avec triméthoprimeEn supplément aux cultures déjà mentionnées ci-dessus : RESULTATS
La morphologie typique des colonies sur ces milieux est comme suit : Petites, gris-blanc à incolores, mucoïdes Moyennes ou grandes, bleu-gris, mucoïdes LIMITES DE LA METHODE – Les milieux dans lesquels les inhibiteurs V-C-N et V-C-N-T sont incorporés sont des
milieux sélectifs qui peuvent inhiber d’autres bactéries pathogènes telles l’Haemophilus. De plus, l’existence de
souches de N. gonorrhoeae inhibées par la vancomycine et le lactate de triméthoprime a été rapportée.11,12 Il est
suggéré d’utiliser des boîtes de gélose chocolat et de gélose au sang en conjonction avec les milieux sélectifs pour
faciliter l’isolement d’autres pathogènes possiblement présents dans les échantillons.
Il a été rapporté que la nystatine était relativement inefficace pour inhiber la croissance de levures contaminantes àla concentration recommandée.13 Les gonocoques peuvent être inhibés en présence de Candida albicans.14,15 Alors que les bactéries Neisseria “saprophytes” sont généralement inhibées en milieux sélectifs, la mise en évidenceoccasionnelle de N. lactamica sur la gélose sélective Thayer-Martin a été rapporté.16 Certaines souches des espèces Capnocytophaga peuvent croître sur ces milieux sélectifs quand elles sont inoculéesà partir d’échantillons oropharyngiens.17 Puisqu’il n’existe pas de milieu parfait, on rencontrera des souches de microorganismes à croissance faible dans unmilieu particulier ; la nature des échantillons et l’état physiologique des organismes au moment de l’isolement peutinfluencer la mise en évidence des espèces recherchées ainsi que modifier les effets des caractéristiques d’inhibi-tion d’un milieu sélectif pour les espèces indésirables.
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 5 Il faut noter que les cas sont rares où un seul milieu suffira pour, à la fois, détecter et énumérer des microorganismesspécifiques. Chaque milieu sélectif représente un compromis dans la mesure où les agents sélectifs, quoiqu’inhibantde nombreuses espèces indésirables, peuvent avoir également un effet quelque peu inhibiteur pour certainessouches des espèces recherchées pour lesquelles le milieu a été conçu.
Il faudra consulter les textes appropriés pour obtenir plus d’informations.17,18 BIBLIOGRAPHIE : voir la rubrique “References” du texte anglais.
D Becton Dickinson France S.A.
11 rue Aristide Bergès38800 Le Pont de Claix, France BBL Mediumsupplement zur Selektion von pathogenen Neisseria
Zehn Fläschchen, lyophilisiert; jedes Fläschchen wird auf 2 mL rekonstituiert Best.-Nr. 212227
Zehn Fläschchen, lyophilisiert; jedes Fläschchen wird auf 10 mL rekonstituiert V-C-N-T Hemmer Zehn Fläschchen, lyophilisiert; jedes Fläschchen wird auf 10 mL rekonstituiert VERWENDUNGSZWECK – V-C-N Hemmer ist eine Mischung der Antibiotika Vancomycin, Colistin und Nystatin, die
Kulturmedien zur selektiven Isolierung von Neisseria gonorrhoeae und N. meningitidis zugesetzt wird.
V-C-N-T Hemmer enthält neben der Antibiotikamischung des V-C-N Hemmers zusätzlich Trimethoprim, um durcheine erhöhte Selektivität der Isolierungsmedien die Isolierung von pathogenen Neisseria zu verbessern.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG – V-C-N Hemmer enthaltende Medien, z.B. Thayer-Martin-Selektiv-
agar,1 werden zur Isolierung von pathogenen Neisseria aus Rachen, Vagina, Rektum oder Urethra verwendet.1-3
Hierdurch wird nicht nur ein Überwachsen der Gonokokken und Meningokokken durch kontaminierende Keime
minimiert, sondern es werden auch “saprophytische” Neisseria-Spezies fast vollständig unterdrückt.
Durch Zugabe von Trimethoprim haben Martin et al. den Thayer-Martin-Selektivagar modifiziert und produzierten sodas in Flaschen mit Kohlendioxid angereicherter Atmosphäre erhältliche Transgrow-Medium und den als Platteerhältlichen modifizierten Thayer-Martin-Agar.4,5 Beim Vergleich mit dem Thayer-Martin-Selektivagar wurde hierbeieine beträchtlich größere Zahl positiver Gonokokken-Isolate aus klinischen Proben festgestellt. Dies beruht auf derHemmung schwärmender Proteus-Spezies.5-7 Aufgrund seiner verbesserten Leistung wird das von Martin u.a. modi-fizierte Medium anstelle von früheren Formeln zur Isolierung von N. gonorrhoeae empfohlen.8-10 VERFAHRENSPRINZIP – V-C-N Hemmer enthält Vancomycin zur Hemmung grampositiver kontaminierender Keime,
Colistin zur Hemmung gramnegativer Bakterien (einschließlich Pseudomonas-Spezies) und Nystatin zur Unterdrückung
von Hefenwachstum.
V-C-N-T Hemmer enthält die gleiche Antibiotikamischung wie V-C-N Hemmer sowie Trimethoprim, das Proteus-Spezies hemmt.
REAGENZIEN
Ungefähre Zusammensetzung* pro 1 mL rekonstituierte Lösung: *Abgestimmt und/oder supplementiert auf die geforderten Testkriterien. Sicherheitshinweise: Nur für den Laborgebrauch.
V-C-N Hemmer und V-C-N-T Hemmer sind nur zur Anwendung in Kulturmedien und nicht für den therapeutischenEinsatz bei Menschen oder Tieren bestimmt. Bei der Rekonstitution und Anwendung dieses Mediensupplementssollten die Grundsätze aseptischer Arbeitsweise eingehalten werden. Bitte die “Anleitungen” lesen.
Dieses Produkt enthält trockenen Naturkautschuk.
Aufbewahrung und Rekonstitution: Nach Erhalt bei -20 bis +8 °C lagern. Nach der Rekonstitution sofort verwen-
den oder bei mindestens -20 °C lagern und innerhalb von zwei Wochen verwenden. Wiederholtes Einfrieren und
Auftauen vermeiden.
Unter Verwendung einer sterilen Spritze und Kanüle jedes lyophilisierte Fläschchen rekonstituieren, indem aseptischdie folgenden Volumina destilliertes Wasser zugegeben werden: 212227 – 2 mL; 212228 und 212408 – 10 mL.
Das angegebene Verfallsdatum gilt nur für das lyophilisierte Produkt und bei vorschriftsmäßiger Lagerung.
Produktverfall: Rekonstituierte Reagenzien zum Zeitpunkt der Anwendung auf Anzeichen von Kontamination, Evapo-
ration oder sonstige Anzeichen von Produktverfall untersuchen.
VERFAHREN
Mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Je nach bestelltem Produkt wird eines der oben aufgeführten Mediensupplements
mitgeliefert.
Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien, Qualitätskontrollorganismen und die
Laborgeräte, die für dieses Verfahren benötigt werden.
Anleitungen : Zubereitung des Thayer-Martin-Agars —
1. Eine Basis von doppelter Konzentration herstellen, indem in einem 500-mL-Kolben 7,2 g BBL GC Basalagar oder
GC II Basalagar in 100 mL destilliertem Wasser suspendiert werden. Gut durchmischen, unter wiederholtemSchütteln erhitzen und ca. 1 min kochen, um vollständige Lösung aller Substanzen sicherzustellen.
2. 2 g BBL Hämoglobin-Pulver in 100 mL destilliertem Wasser suspendieren, um eine 2%ige Lösung herzustellen.
(2 g Hämoglobin-Pulver mit 2 bis 3 mL destilliertem Wasser mischen, bis eine glatte Paste vorliegt. Allmählich
das restliche Wasser zugeben, bis die Lösung homogen ist. Werden größere Mengen benötigt, dieselbe Methode
und dasselbe Verhältnis von Hämoglobin zu destilliertem Wasser verwenden.) Als Alternative kann 2%ige, auf ca.
50 °C erwärmte BBL Hämoglobinlösung verwendet werden.
3. Sowohl den GC Basalagar oder GC II Basalagar, als auch die Hämoglobinlösung, falls letztere aus Pulver hergestellt wurde, 15 min lang bei 121 °C im Autoklaven sterilisieren.
4. Die sterilen Lösungen auf ca. 50 °C abkühlen.
5. 2 mL BBL IsoVitaleX Anreicherung rekonstituieren (siehe Anweisungen in der Packungsbeilage).
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 6 6. Zur Rekonstitution von V-C-N Hemmer siehe “Aufbewahrung und Rekonstitution”.
7. Den 100 mL des sterilen, abgekühlten GC Basalagars oder GC II Basalagars werden aseptisch 100 mL Hämo- globin, 2 mL IsoVitaleX Anreicherung und 2 mL V-C-N Hemmer zugesetzt.
8. Vorsichtig aber gut durchmischen und in sterile Petrischalen oder andere sterile Gefäße geben.
Die 10 mL des V-C-N Hemmers werden in ähnlicher Weise verwendet, indem der rekonstituierte Inhalt eines
Fläschchens zu 500 mL sterilem, abgekühltem GC Basalagar oder GC II Basalagar (36,0 g Basis in 500 mL destil-
liertem Wasser lösen, um eine Basis von doppelter Konzentration herzustellen), 500 mL steriler, 2%iger Hämoglobin-
lösung (von ca. 50 °C) und 10 mL IsoVitaleX Anreicherung zugegeben wird.
Zubereitung des modifizierten Thayer-Martin-Agars und Transgrow-Mediums mit Trimethoprim:
1. Zur Zubereitung des Transgrow-Mediums zusätzlichen Agar zum GC Basalagar oder GC II Basalagar zusetzen, um die Endkonzentration des Agars auf 2% einzustellen. Danach 15 min bei 121 °C im Autoklaven sterilisieren.
2. Nach dem Mischen des sterilen, abgekühlten (ca. 50 °C) GC Basalagars oder GC II Basalagars, der sterilen und abgekühlten Hämoglobinlösung, der IsoVitaleX Anreicherung und des V-C-N-T Hemmers, 6 mL sterile, 25%ige
Dextroselösung zu jeweils einem Liter Medium geben.*
3. Aseptisch auf Petrischalen (modifizierter Thayer-Martin-Agar) oder (zur Herstellung von Transgrow-Medium mit Trimethoprim) auf flach liegende, sterile Medizinfläschchen von 8 bis 10 mL Inhalt verteilen. Die Fläschchen wer-den mit Gummi-Schraubverschlüssen lose verschlossen.
4. Nach dem Abkühlen und Verfestigen des Mediums wird in den Flaschen eine Kohlendioxid-Atmosphäre hergestellt, indem mehrere Flaschen in eine Vakuumkammer gebracht werden, danach die Luft mit einerVakuumpumpe (6,8 kg negativer Druck) abgesaugt und die Kammer mit einer Mischung aus gefiltertemKohlendioxid (10 %) und gefilterter Luft (90 %) gefüllt wird, bis in der Kammer ein Überdruck von 2,3 kg vorhan-den ist. Diesen Schritt dreimal wiederholen. Nach der dritten Gasfüllung 2 bis 3 Stunden lang einen Überdruckin der Kammer aufrechterhalten, bevor der Druck in der Kammer auf Atmosphärendruck gesenkt wird.
5. Nach dem Öffnen der Kammer die Schraubverschlüsse luftdicht festdrehen.
* In der BBL Formel für den modifizierten Thayer-Martin-Agar wurde die zusätzliche Dextrose eliminiert, um das
Wachstum von N. gonorrhoeae zu verbessern.
Qualitätskontrolle durch den Anwender – Das lyophilisierte und rekonstituierte Supplement wie unter
“Produktverfall” beschrieben auf Anzeichen von Verfall überprüfen. Die Leistungsprüfung des fertigen Mediums durch
Inokulation mit Reinkulturen stabiler Kontrollorganismen durchführen, wobei bekannte, gewünschte Reaktionen
auftreten sollten. Folgende Testkulturen werden empfohlen:
Staphylococcus epidermidis, ATCC 12228 Modifizierter Thayer-Martin-Agar und Transgrow-Medium mit TrimethoprimZusätzlich zu den oben erwähnten Kulturen: ERGEBNISSE
Die typische Morphologie der Kulturen auf diesen Medien ist folgendermaßen: VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN – Medien, denen V-C-N Hemmer und V-C-N-T Hemmer zugesetzt wurden,
sind selektive Medien, die andere pathogene Bakterien wie z.B. Haemophilus hemmen können. In der Literatur wird
auch über Stämme von N. gonnorrhoeae berichtet, die durch Vancomycin und Trimethoprimlactat gehemmt wer-
den.11,12 Es wird empfohlen, Schokoladenagar und Blutagarplatten in Verbindung mit selektiven Medien zu verwen-
den, um die Isolierung anderer, eventuell in der Probe vorhandener pathogener Keime zu unterstützen.
Es wird berichtet, daß Nystatin bei der empfohlenen Konzentration eine relativ ineffektive Wachstumshemmung vonkontaminierenden Hefen zeigt.13 Gonokokken werden u.U. durch die Anwesenheit von Candida albicans gehemmt.14,15 Während “saprophytische” Neisseria normalerweise durch selektive Medien unterdrückt werden, wurde über diegelegentliche Isolierung von N. lactamica auf selektivem Thayer-Martin-Agar berichtet.16 Einige Stämme von Capnocytophaga-Spezies können auf diesen selektiven Medien wachsen, wenn das Inokulat ausProben vom Oropharynx stammt.17 Da es ein perfektes Medium nicht gibt, trifft man auf Mikroorganismen, die auf einem bestimmten Medium schlechtwachsen. Der Zustand der Abstriche oder Proben selber und der physiologische Zustand der Organismen bei derIsolierung können die Isolierung der gewünschten Spezies beeinflussen und auch die Hemmwirkungsmerkmaleeines selektiven Mediums für unerwünschte Spezies modifizieren.
Es muß erwähnt werden, daß ein einziges Medium nur selten sowohl zum Nachweis wie auch zur Auszählung spezi-fischer Mikroorganismen ausreicht. Jedes selektive Medium ist insoweit ein Kompromiß, als daß selektiveSubstanzen, die viele unerwünschte Spezies hemmen können, u.U. auch eine geringe Hemmung von spezifischenStämmen der gewünschten Spezies, für die das Medium entwickelt wurde, zeigen können.
Für weitere Informationen hierzu wird auf die Literatur verwiesen.17,18 LITERATURNACHWEIS: S. “References” im englischen Text.
D Becton Dickinson France S.A.
11 rue Aristide Bergès38800 Le Pont de Claix, France ITALIANO
Supplemento al terreno BBL per la ricerca di Neisseria patogena
Dieci flaconi, liofilizzati; ricostituiti da 2 mL l’uno Nº di cat. 212227
Dieci flaconi, liofilizzati; ricostituiti da 10 mL l’uno Dieci flaconi, liofilizzati; ricostituiti da 10 mL l’uno USO PREVISTO – L’inibente V-C-N è una miscela antibiotica di vancomicina, colistina e nistatina che viene aggiunta
ai terreni di coltura per l’isolamento selettivo di Neisseria gonorrhoeae e N. meningitidis.
L’inibente V-C-N-T contiene la stessa miscela antibiotica dell’inibente V-C-N, con l’aggiunta di trimethoprim permigliorare il recupero dei ceppi patogeni di Neisseria aumentando la selettività dei terreni di isolamento.
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 7 SOMMARIO E SPIEGAZIONE – I terreni contenenti l’inibente V-C-N, come l’agar selettivo Thayer-Martin,1 sono
usati per isolare i ceppi patogeni di Neisseria da faringe, vagina, retto o uretra.1-3 Non solo viene minimizzata la
crescita dei contaminanti che possono “coprire” quella dei gonococchi e meningococchi, ma le specie “saprofite”
Neisseria sono quasi completamente inibite.
Martin e coll. hanno modificato l’agar selettivo Thayer-Martin aggiungendo trimethoprim e producendo così il terrenoTransgrow in flaconi con un’atmosfera arricchita di anidride carbonica e l’agar Thayer-Martin modificato in piastra.4,5È stato riscontrato un numero notevolmente superiore di isolati gonococchi positivi provenienti da campioni clinici,rispetto all’agar selettivo Thayer-Martin, a causa dell’inibizione delle specie Proteus sciamanti.5-7 Vista la sua miglioreperformance, lo si raccomanda per l’isolamento di N. gonorrhoeae.8-10 PRINCIPI DELLA PROCEDURA – La miscela V-C-N contiene vancomicina che inibisce i contaminanti gram-posi-
tivi, colistina che inibisce i batteri gram-negativi, fra cui le specie Pseudomonas, e nistatina per sopprimere la
crescita dei lieviti.
L’inibente V-C-N-T contiene la stessa miscela antibiotica dell’inibente V-C-N, con l’aggiunta di trimethoprim cheinibisce le specie Proteus.
REAGENTI
Formula approssimata* per 1 mL di soluzione ricostituita: *Controllata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento. Precauzioni: Per uso di laboratorio.
Le miscele V-C-N e V-C-N-T sono previste per l’uso con terreni di coltura e non su animali o esseri umani a scopoterapeutico. Seguire tecniche asettiche nella ricostituzione e nell’aggiunta di questi supplementi. Leggere le“Istruzioni”.
Questo prodotto contiene gomma naturale allo stato secco.
Istruzioni per la conservazione e la ricostituzione: Al ricevimento conservare da -20 a +8° C. Usare immediata-
mente dopo la ricostituzione o conservare a temperature inferiori a -20° C e usare entro due settimane. Non sconge-
lare e ricongelare ripetutamente.
Ricostituire in sterilità ogni flacone liofilizzato aggiungendo i seguenti volumi di acqua purificata sterile: 212227 – 2 mL;212228 e 212408 – 10 mL.
La data di scadenza vale per il prodotto liofilizzato, conservato secondo le istruzioni.
Deterioramento del prodotto: Esaminare al momento dell’uso i reagenti ricostituiti per verificare che non vi siano
tracce di contaminazione, evaporazione o altri segni di deterioramento.
PROCEDURA
Materiale fornito: A seconda del prodotto ordinato, viene fornito uno dei supplementi per terreni elencati qui sopra.
Materiali non forniti: Terreni di coltura ausiliari, reagenti, organismi di controllo qualità e le apparecchiature di la-
boratorio necessarie per questo procedimento.
Istruzioni: Preparazione del terreno Thayer-Martin —
1. Preparare una base a doppia concentrazione sciogliendo 7,2 g di base agar GC BBL o base agar GC II in
100 mL di acqua purificata, usando un matraccio da 500 mL. Mescolare accuratamente, riscaldare agitando fre-quentemente e bollire per circa 1 min onde garantire il completo scioglimento di tutti gli ingredienti.
2. Sciogliere 2 g di polvere di emoglobina BBL in 100 mL di acqua purificata per ottenere una soluzione al 2%.
(Mescolare 2 g di polvere di emoglobina con 2 – 3 mL di acqua purificata fino ad ottenere una pasta uniforme
Aggiungere gradatamente il resto dell’acqua fino a quando la soluzione non sia omogenea. Se sono necessari
volumi maggiori, usare lo stesso metodo, mantenendo lo stesso rapporto di emoglobina/acqua purificata.)
Altrimenti, usare la soluzione di emoglobina BBL al 2% riscaldata a circa 50° C.
3. Sterilizzare la base agar GC o la base agar GC II e la soluzione di emoglobina, se preparata dalla polvere, in auto- 4. Raffreddare le soluzioni a circa 50° C.
5. Ricostituire il supplemento IsoVitaleX BBL, 2 mL (seguire le istruzioni sul foglietto illustrativo).
6. Per ricostituire la miscela V-C-N, vedere “Istruzioni per la conservazione e la ricostituzione”.
7. Aggiungere in sterilità 100 mL di emoglobina, 2 mL di supplemento IsoVitaleX, 2 mL di miscela V-C-N a 100 mL
di base agar GC o base agar GC II sterile raffreddata.
8. Mescolare gentilmente ma accuratamente e distribuire su piastre Petri o altri contenitori sterili.
La miscela V-C-N, 10 mL viene usata in modo simile, aggiungendo il contenuto ricostituito di un flacone a 500 mL
di base agar GC o base agar GC II sterile raffreddata (36,0 g di base in 500 mL di acqua purificata per ottenere una
base a doppia concentrazione), 500 mL di soluzione di emoglobina sterile al 2% (circa 50° C) e 10 mL di supple-
mento IsoVitaleX.
Preparazione del terreno Thayer-Martin modificato e del terreno Transgrow con trimethoprim:
1. Per preparare il terreno Transgrow, aggiungere altro agar alla base GC o alla base GC II per portare la concen- trazione finale di agar al 2% e sterilizzare in autoclave a 121° C per 15 minuti.
2. Dopo aver mescolato la base GC o la base GC II sterile raffreddata (circa 50° C), la soluzione di emoglobina steri- le raffreddata, il supplemento IsoVitaleX e la miscela V-C-N-T, aggiungere 6 mL di soluzione di destrosio sterile
al 25% ad ogni litro di terreno.*
3. Distribuire sterilmente su piastre Petri (agar Thayer-Martin modificato) o (per la preparazione del terreno Transgrow con trimethoprim) in provette sterili da 1 oncia (8 – 10 mL di volume) poste orizzontalmente e con itappi parzialmente svitati. 4. Una volta che il terreno si sia raffreddato e solidificato, introdurre un’atmosfera di anidride carbonica, collocando un gruppo di provette in una camera pre-vuoto e facendo uscire l’aria con una pompa a vuoto (pressione nega-tiva di 6,8 kg), per poi riempire la camera con una miscela filtrata di 10% CO2 – 90% aria fino a quando la came-ra non raggiunga una pressione positiva di 2,3 kg; ripetere tre volte. Dopo la terza volta, lasciare la camera allapressione positiva per 2 – 3 ore prima di riportarla a quella atmosferica.
5. Dopo aver aperto la camera, stringere i tappi a vite in modo da chiudere ermeticamente le provette.
* Nella formulazione BBL per l’agar Thayer-Martin modificato è stato eliminato il destrosio addizionale per migliorare
la crescita di N. gonorrhoeae.
Controllo di qualità per l’utente – Esaminare il supplemento liofilizzato e ricostituito per verificare che non vi siano
segni di deterioramento descritti nella sezione “Deterioramento del prodotto”. Controllare la performance del terreno
preparato inoculandolo con colture pure di organismi di controllo che diano reazioni note. Si raccomandano le
seguenti colture:
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 8 Staphylococcus epidermidis, ATCC 12228 Agar Thayer-Martin modificato e terreno Transgrow con TrimethoprimOltre alle colture sopra elencate: RISULTATI
La morfologia tipica delle colonie su questi terreni è la seguente: Colonie piccole, bianco-grigie o incolori, mucoidi Colonie medio-larghe, grigio-blu, mucoidi LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA – I terreni in cui sono incorporati gli antibiotici V-C-N e V-C-N-T sono terreni
selettivi che possono inibire altri batteri patogeni, ad esempio Haemophilus. Inoltre, è stata rilevata l’esistenza di
ceppi di N. gonorrhoeae inibiti da vancomicina e trimethoprim lattato.11,12 Si suggerisce di usare piastre di agar cioc-
colato e agar sangue insieme ai terreni selettivi, come ausilio nell’isolamento di altri patogeni che possono essere
presenti nel campione.
La nistatina è risultata relativamente inefficace nell’inibizione della crescita di contaminanti quali i lieviti alla concen-trazione raccomandata.13 I gonococchi possono essere inibiti in presenza di Candida albicans.14,15 Le specie “saprofite” Neisseria sono in genere inibite nei terreni selettivi; è stata tuttavia notata l’occasionale crescitadi N. lactamica su agar Thayer-Martin.16 Alcuni ceppi delle specie Capnocytophaga possono crescere su questi terreni selettivi se sono presenti nei campio-ni faringei.17 Un terreno ideale non esiste; alcuni microrganismi possono crescere male su un terreno particolare, la natura stessa deicampioni e lo stato fisiologico del ceppo batterico su cui si sta eseguendo l’isolamento possono influire sul recuperodella specie voluta e modificare l’effetto delle caratteristiche inibenti di un terreno selettivo su specie non desiderate.
Si deve tenere presente che solo in casi rari un terreno singolo basterà sia per il rilevamento che per la conta di speci-fici microrganismi. Ogni terreno selettivo rappresenta un compromesso in quanto gli agenti selettivi da un lato inibi-ranno molte specie indesiderate, ma d’altro canto possono inibire in qualche misura ceppi specifici delle speciedesiderate per cui il terreno è previsto.
Consultare i relativi testi per ulteriori informazioni.17,18 BIBLIOGRAFIA: Vedere “References” nel testo inglese.
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11 rue Aristide Bergès38800 Le Pont de Claix, France ESPAÑOL
Suplemento para medios BBL para la selección de Neisseria patógena
Diez frascos liofilizados; cada uno se reconstituye a un volumen de 2 mL Nº de cat. 212227
Diez frascos liofilizados; cada uno se reconstituye a un volumen de 10 mL Inhibidor V-C-N-T Diez frascos liofilizados; cada uno se reconstituye a un volumen de 10 mL USO PREVISTO – El inhibidor V-C-N es una mezcla antibiótica de vancomicina, colistina y nistatina la cual se incor-
pora a medios de cultivo para permitir el aislamiento selectivo de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis.
El inhibidor V-C-N-T contiene la misma mezcla antibiótica que el inhibidor V-C-N pero agrega el antibiótico trimeto-prima. De esta forma se incrementa la selectividad de los medios de aislamiento mejorando la recuperación deNeisseria patógena.
RESUMEN Y EXPLICACION – Los medios que contienen el inhibidor V-C-N, como por ejemplo, el agar selectivo
Thayer-Martin1, se utilizan para el aislamiento de Neisseria patógena de garganta, vagina, recto o uretra.1-3 De esta
forma no sólo se minimiza el sobrecrecimiento de gonococos y meningococos por contaminantes, sino que también
se suprime en forma casi completa a las especies “saprofíticas” de Neisseria.
Martin y otros modificaron el agar selectivo Thayer-Martin mediante la adición de trimetoprima para producir en fras-cos el medio Transgrow con una atmósfera enriquecida de dióxido de carbono y en placas el agar Thayer-Martinmodificado.4,5 Se dio a conocer un número significativamente mayor de aislados gonococales positivos a partir demuestras clínicas en comparación con los obtenidos en el agar selectivo Thayer-Martin. Esto se debe a la inhibiciónde las abundantes especies Proteus.5-7 Debido a su mejorado rendimiento, se recomienda utilizar este agar modifi-cado en lugar de las formulaciones anteriores para el aislamiento de N. gonorrhoeae.8-10 PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO – El inhibidor V-C-N contiene vancomicina para inhibir contaminantes gram-
positivos, colistina para inhibir bacterias gramnegativas, incluyendo las especies de Pseudomonas, y nistatina para
suprimir el crecimiento de levaduras.
El inhibidor V-C-N-T contiene la misma mezcla antibiótica que el inhibidor V-C-N con la adición de trimetoprima queinhibe las especies Proteus.
REACTIVOS
Fórmula aproximada* por 1 mL de solución reconstituida: *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. Precauciones: Para uso de laboratorio.
Los inhibidores V-C-N y V-C-N-T están destinados para el uso en medios de cultivo y no para utilizarse en tratamien-tos de humanos o animales. Observe las técnicas asépticas durante la reconstitución y la adición de estos suple-mentos a los medios. Lea las “Instrucciones”.
Este producto contiene goma natural seca.
95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 9 Instrucciones para el almacenamiento y la reconstitución: Al recibir el producto, almacénelo entre -20 y +8° C.
Después de reconstituirlo, úselo inmediatamente o almacénelo a una temperatura inferior a -20° C y utilícelo dentro
de dos semanas. Evite congelar y descongelar repetidamente.
Utilizando una jeringa y aguja estériles, reconstituya cada frasco liofilizado agregando asépticamente los siguientesvolúmenes de agua purificada estéril: Nº de cat. 212227 – 2 mL; Nº de cat. 212228 y 212408 – 10 mL.
La fecha de caducidad se aplica al producto liofilizado almacenado en la forma indicada.
Deterioro del producto: Examine los reactivos reconstituidos al momento de usarlos en busca de indicios de con-
taminación, evaporación o cualquier otro signo de deterioro.
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados: Dependiendo del producto ordenado, se provee uno de los suplementos para medio de
cultivo indicados anteriormente.
Materiales no suministrados: Medios de cultivo auxiliares, reactivos, organismos para el control de calidad y
equipo de laboratorio que se requiera para este procedimiento.
Instrucciones: Preparación del agar Thayer-Martin —
1. Prepare una base doblemente concentrada mediante la suspensión de 7,2 g de agar base GC BBL o agar base
GC II en 100 mL de agua purificada, utilizando un matraz de 500 mL. Mezcle bien. Caliente agitando frecuente-mente y hierva durante 1 minuto aproximadamente para asegurar una disolución completa.
2. Suspenda 2 g de hemoglobina en polvo BBL en 100 mL de agua purificada para obtener una solución al 2%.
(Mezcle 2 g de hemoglobina en polvo con 2 a 3 mL de agua purificada hasta obtener una pasta suave. Lleve la
solución a un volumen de 100 mL agregando el agua purificada en forma gradual hasta que la solución sea
homogénea. En caso de requerirse volúmenes mayores, utilice el mismo método, manteniendo las mismas pro-
porciones de hemoglobina y agua purificada). Como alternativa, use una solución de hemoglobina BBL al 2%
calentada a aproximadamente 50° C.
3. Esterilice el agar base GC o el GC II y la solución de hemoglobina, si ésta fue preparada a partir del polvo. Para ello, autoclave a 121° C durante 15 minutos.
4. Enfríe las soluciones estériles a aproximadamente 50° C.
5. Reconstituya el enriquecimiento IsoVitaleX BBL a 2 mL (vea las instrucciones en el prospecto).
6. Para reconstituir el inhibidor V-C-N, vea las “Instrucciones para el almacenamiento y la reconstitución”.
7. Agregue asépticamente los 100 mL de hemoglobina, 2 mL de enriquecimiento IsoVitaleX y 2 mL de inhibidor
V-C-N a los 100 mL del agar base GC o GC II estéril y enfriado.
8. Mezcle suavemente pero en forma completa y distribuya sobre placas de Petri estériles u otros envases estériles.
El inhibidor V-C-N reconstituido a 10 mL se utiliza de modo similar, agregando los contenidos reconstituidos de un
frasco a 500 mL de agar base GC o GC II estéril y enfriado (36,0 g de la base en 500 mL de agua purificada para
obtener una base de concentración doble), 500 mL de una solución de hemoglobina estéril al 2% (aproximadamente
a 50° C) y 10 mL de enriquecimiento IsoVitaleX.
Preparación del agar Thayer-Martin modificado y del medio Transgrow con trimetoprima:
1. Para preparar el medio Transgrow, agregue una cantidad extra de agar al agar base GC o GC II para llevar la concentración final del agar a un 2% y esterilice con autoclave a 121° C durante 15 minutos.
2. Después de mezclar el agar base GC o GC II estéril y enfriado (a aproximadamente 50° C), la solución de hemo- globina estéril y enfriada, el enriquecimiento IsoVitaleX y el inhibidor V-C-N-T, agregue 6 mL de una solución
estéril de dextrosa al 25% a cada litro de medio.*
3. Asépticamente, distribuya el agar Thayer-Martin modificado en placas de Petri o el medio Transgrow con trime- toprima en frascos de prescripción estériles de 1 onza (8 a 10 mL de volumen) colocados en posición horizon-tal y luego ponga las tapas de rosca de goma sin ajustarlas.
4. Después de que el medio se haya enfriado y solidificado en los frascos, introduzca una atmósfera de dióxido de carbono en los frascos, colocando un grupo de frascos en una cámara de vacío y extrayendo el aire con unabomba de vacío (6,8 kg de presión negativa) y rellene la cámara con una mezcla filtrada de 10% de CO2 y 90%de aire hasta que la cámara se encuentre a una presión positiva de 2,3 kg; repita este procedimiento tres veces.
Después de la tercera vez, deje la cámara a una presión positiva durante 2 a 3 horas antes de retornarla a la pre-sión atmosférica.
5. Al abrir la cámara, ajuste las tapas de rosca de los frascos para sellar la entrada de aire.
* En la formulación BBL para el agar Thayer-Martin modificado, el exceso de dextrosa ha sido eliminado para mejo-
rar el crecimiento de N. gonorrhoeae.
Control de calidad por parte del usuario – Examine el suplemento liofilizado y reconstituido en busca de indicios
de deterioro como se describe en la sección “Deterioro del producto”. Evalúe el rendimiento del medio final median-
te la inoculación con cultivos puros de organismos de control estables que produzcan reacciones conocidas y
deseadas. Se recomiendan los siguientes cultivos:
Staphylococcus epidermidis, ATCC 12228 Agar Thayer-Martin modificado y medio Transgrow con trimetoprimaAdemás de los cultivos indicados anteriormente: RESULTADOS
La morfología típica de las colonias en estos medios se describe a continuación: Pequeñas, de blancas grisáceas a incoloras, mucoides.
Medianas a grandes, azul grisáceas, mucoides.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO – Los medios a los que se les han incorporado los inhibidores V-C-N y
V-C-N-T son medios selectivos que pueden inhibir a otras bacterias patógenas, como por ejemplo, Haemophilus.
También se ha reportado la existencia de cepas de N. gonorrhoeae inhibidas por vancomicina y lactato de trimeto-
prima.11,12 Se recomienda que las placas con agar chocolate y con agar sanguíneo sean utilizadas junto con medios
selectivos para colaborar en el aislamiento de otros patógenos que pueden estar presentes en la muestra.
Se ha reportado que la nistatina, a la concentración recomendada, es relativamente inefectiva en la inhibición de con -taminantes en las levaduras.13 Los gonococos pueden estar inhibidos en presencia de Candida albicans.14,15 Mientras que las especies “saprofíticas” de Neisseria son generalmente suprimidas por medios selectivos, se hainformado la recuperación ocasional de N. lactamica en el agar selectivo Thayer-Martin.16 Algunas cepas de especies Capnocytophaga pueden crecer en estos medios selectivos cuando se inoculan conmuestras orofaríngeas.17 95-023MB BBLMed.Sup.MLL 11/21/00 2:54 PM Page 10 Ya que el medio perfecto no existe, algunas cepas de microorganismos crecen pobremente en un medio en particu-lar; la naturaleza de las muestras o las muestras en sí y el estado fisiológico de los organismos aislados puedeninfluir en la recuperación de las especies deseadas y a su vez modificar los efectos de las características inhibido-ras de un medio selectivo para especies no deseadas.
Debe notarse que las situaciones en que el uso de un solo medio satisfará la detección y la enumeración de microor-ganismos específicos son relativamente raras. Cada medio selectivo representa un compromiso en el cual losagentes selectivos, mientras son inhibitorios para muchas especies no deseadas, pueden también ser inhibitoriosen cierta medida para cepas específicas de especies deseadas para las cuales el medio fue diseñado.
Para mayor información consulte los textos apropiados.17,18 BIBLIOGRAFIA: Ver “References” en el texto en inglés.
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Source: http://www.interlabdist.com.br/dados/produtos/bula/doc/17548da80d3756f0.pdf